جداسازی ژن مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز(mdhar) از گیاه آلوروپوس لیتورالیس ( aeluropus littolaris ) و انتقال آن به گیاه توتون (nicotina tabacum)

شوری خاک یکی از عوامل غیرزنده ی پراهمیتی است که عملکرد محصول را در نواحی خشک و نیمه خشک تحت تاثیر قرار می دهد. تنش های محیطی گوناگون از جمله شوری با برهم زدن شرایط مطلوب، سبب بروز اختلالات متابولیسمی در سلولهای گیاهی می گردند که یکی از عوامل اصلی این اختلالات افزایش تولید انواع گونه های اکسیژن فعال (ros) می باشد. مسیر گلوتاتیون-آسکوربات نقش مهمی را درسمیت زدایی گونه های فعال اکسیژن (ros) در گیاهان آوندی بازی می کند. یکی از آنزیم های کلیدی در این مسیر مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز(mdhar) با کوفاکتور fad است که نقش احیاکنندگی رادیکال های مونودهیدروآسکوربات را بر عهده دارد. در تحقیق حاضر آنزیم مونودهیدرو آسکوربات ردوکتاز، از گیاه هالوفیت آلوروپوس لیتورالیس ( aeluropus littoralis ) به عنوان منبع ژنتیکی بالقوه برای بهبود تحمل شوری و خشکی در گیاهان، شناسایی، جداسازی و همسانه سازی گردید و به گیاه توتون انتقال داده شد. برای این منظور با توجه به اطلاعات در دسترس در پایگاه ncbi ، پرایمرهای مناسب طراحی و با روش rt-pcr ژن مذکور جداسازی گردید و در وکتور ptz57r/t درون باکتری ا.کلای (dh5?) به منظور توالی یابی همسانه سازی شد. سپس به منظور انتقال به گیاه توتون رقم سامسون، با آنزیم pfu تکثیر گردیده و در ناقل pgreen0029 با پروموتور و ترمیناتور 35s که به طور جداگانه به ناقل مذکور الحاق گردید، درون باکتری اگروباکتریوم (lba4404)، همسانه سازی شد و در نهایت به گیاه توتون رقم سامسون به روش دیسک برگی انتقال داده شد. آزمون pcr گیاهان انتخابی نشان داد که این گیاهان ژن mdhar را دریافت کرده اند و آزمون rt-pcr بیانگر بیان اولیه ی این ژن در گیاهان تراریخت است. ژن mdhar شامل 1436 جفت باز و فاقد نواحی اینترونی است. مقایسه ی توالی به دست آمده با توالی های سایر mdhar های گیاهی ثبت شده در بانک ژن، بیانگر شباهت بالای این ژن با سایر mdhr های جدا شده از گیاهان خانواده ی گندمیان بوده که بیشترین شباهت با مقادیر 89 درصد با mdhar سورگم(sorghum bicolor)، وجود داشت.